噬菌斑测检测分析系统厂家实验步骤与原理示意 （示意图如下）
大致原理上分为如下7个步骤，详情已具体产品说明书为准
Step.1 包被：将单clone捕获Antibody添加到乙醇处理的PVDF膜板上
Step.2 细胞孵育：在有刺激的情况下加入细胞，孵育，细胞分泌细胞因子
Step.3 捕获分泌物：activation后的细胞，分泌的细胞因子被周围的Antibody结合捕获
Step.4 检测Antibody：去除细胞，清洗平板，加入生物素化的检测Antibody
Step.5 链霉亲和素-酶偶联物：加入链霉亲和素偶联物，保证后续在膜上形成斑点
Step.6 加反应底物：当酶催化时，显色底物形成不溶性沉淀
Step.7 结果分析：在自动点阅读器中对结果进行分析。每个斑点对应一个分析物分泌细胞
T细胞的ELISpot分析应用：
ELISpot是研究特异性免疫反应的敏感方法，能够区分活化的T细胞亚群。例如，Th1细胞产生干扰素-γ、IL-2和TNF-α，而Th2细胞产生其他细胞因子，如IL-4、IL-5和IL-13。例如，这被广泛应用于infectious disease、cancer、过敏和自身免疫性疾病的研究。
在vaccine研究中，ELISpot是一种标准工具，用于通过测量激发强大T细胞反应的能力(通常是干扰素-γ的分泌)来确定vaccine的有效性。基于ELISpot的诊断分析已经可用，包括一种通过测量T细胞对tuberculosis分枝Bacillus特定抗原的反应分泌干扰素-γ来检测tuberculosis病感染患者的测试。
噬菌斑测检测分析系统厂家（ELISPOT）的原理是什么呢
（一）原理：细胞受到刺激后局部产生细胞因子，被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后，再与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。
（二）ELISPOT与ELISA的区别
1.ELISA通过显色反应，在Microplate reader上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2.ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。
3.由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb，在研究者以刺激剂activation细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。
以上信息由专业从事噬菌斑测检测分析系统厂家的世联博研于2025/5/9 11:33:28发布
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