免疫酶联斑点试验报价解决的问题
ELISPOT 分析仪的出现解决了以下问题：
哪些斑点是抗原特异性 T 细胞产生的（此斑点具有进一步分析价值），哪些是无关细胞产生的（此斑点没有 T 细胞研究价值）
斑点大小的意义
在对不同细胞因子计数和分析时，如何定义斑点MIN和MAX尺寸
如何从单个细胞基础上分析
实验accurate度有多高？如果一个细胞产生相似的细胞因子，在多大程度上会干扰分析结果？
几次重复实验才能使结果更有意义？
免疫酶联斑点试验报价（ELISPOT）的原理是什么呢
（一）原理：细胞受到刺激后局部产生细胞因子，被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后，再与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。
（二）ELISPOT与ELISA的区别
1.ELISA通过显色反应，在Microplate reader上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2.ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。
3.由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb，在研究者以刺激剂activation细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。
酶联免疫斑点技术（Enzyme Linked Immunospot Assay，简称ELISPOT）
是细胞免疫学研究中更敏感的检测方法，可以在单细胞水平对Antibody分泌细胞(ASC)及细胞因子(CK)分泌细胞进行检测，比ELISA和有限稀释法等具有更髙的灵敏性，能从20万-30万细胞中检岀1个分泌该蛋白的细胞。并且该方法能够对抗原刺激后的Living cells进行功能性检测，具有较髙的特异性、直观可信度髙，并且易操作，已被广泛用于分泌CK细胞检测或ASC测定中，在国内外免疫学界获得了广泛的应用。
ELISPOT实验步骤
淋巴细胞受到抗原刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被ELISPOT板底PVDF膜上(预包被的)的特异性单抗捕获。去除细胞后，BEI捕获的细胞因子与生物素标记的单抗结合，其后再与碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记的亲和素结合。加底物显色后，PVDF膜上出现紫色或红褐色的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过酶联免疫斑点分析仪（ELISPOT Reader）对斑点的进行自动计数和分析。
以上信息由专业从事免疫酶联斑点试验报价的世联博研于2024/6/27 7:19:51发布
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