BIOREADER 7000 V y供应商实验步骤与原理示意 (示意图如下)
大致原理上分为如下7个步骤,详情已具体产品说明书为准
Step.1 包被:将单clone捕获Antibody添加到乙醇处理的PVDF膜板上
Step.2 细胞孵育:在有刺激的情况下加入细胞,孵育,细胞分泌细胞因子
Step.3 捕获分泌物:activation后的细胞,分泌的细胞因子被周围的Antibody结合捕获
Step.4 检测Antibody:去除细胞,清洗平板,加入生物素化的检测Antibody
Step.5 链霉亲和素-酶偶联物:加入链霉亲和素偶联物,保证后续在膜上形成斑点
Step.6 加反应底物:当酶催化时,显色底物形成不溶性沉淀
Step.7 结果分析:在自动点阅读器中对结果进行分析。每个斑点对应一个分析物分泌细胞
T细胞的ELISpot分析应用:
ELISpot是研究特异性免疫反应的敏感方法,能够区分活化的T细胞亚群。例如,Th1细胞产生干扰素-γ、IL-2和TNF-α,而Th2细胞产生其他细胞因子,如IL-4、IL-5和IL-13。例如,这被广泛应用于infectious disease、cancer、过敏和自身免疫性疾病的研究。
在vaccine研究中,ELISpot是一种标准工具,用于通过测量激发强大T细胞反应的能力(通常是干扰素-γ的分泌)来确定vaccine的有效性。基于ELISpot的诊断分析已经可用,包括一种通过测量T细胞对tuberculosis分枝Bacillus特定抗原的反应分泌干扰素-γ来检测tuberculosis病感染患者的测试。
elispotBIOREADER 7000 V y供应商biosys bioreader elispot自动化检测仪
高分辨率高特异性:
通过使用“光度”强度照明和渐变来区分真/假斑点,对于双色和荧光团来说,更精QUE的3D量化,增强斑点与背景的对比度,有效抑制板孔侧壁反光造成的“幻影现象”,提高检测精度。唯YI能进行单斑点、每孔光密度测定以定量细胞因ZI分泌的照明系统
适用各种载玻片、35-100mm培养碟、6 / 12 / 24 / 48 / 96/384孔各型培养板和滴定板。对于实验室常用的U-Cytech公司、Mabtech公司、 R&D公司、 Diaclone公司、 Millipore公司、Whatman公司、 Nunc公司等各型实验室常用ELISPOT KIT(透明板、白色板、PVDF和尼龙膜板)、Greiner等公司的透明培养板、不透明(白色)培养板、以及PVDF膜培养板均适用,检测Elispot斑点同时可以分析肿LIU细胞的集落、克long斑、病毒斑的识别。
您可以从任何来源和细胞系(无论是人还是动物)中选择Elispot分析
BIOREADER 7000 V y供应商(ELISPOT)的原理是什么呢BIOREADER 7000 V y供应商(ELISPOT)的原理是什么呢
(一)原理:细胞受到刺激后局部产生细胞因子,被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后,再与生物素标记的二抗结合,其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后,PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。
(二)ELISPOT与ELISA的区别
1.ELISA通过显色反应,在Microplate reader上测定吸光度,与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2.ELISPOT通过显色反应,在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞,从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。
3.由于是单细胞水平检测,ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏,能从20万~30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb,在研究者以刺激剂activation细胞时,不会影响活化细胞分泌细胞因子。
以上信息由专业从事BIOREADER 7000 V y供应商的世联博研于2024/5/10 6:55:37发布
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